一、操作室厭氧環(huán)境形成
1、按使用要求放置好必要的配件和器具,并向操作室內(nèi)放入二個(gè)無(wú)毒塑料袋。
2、通電源開(kāi)照明燈,開(kāi)控溫儀,調(diào)節(jié)所需溫度及安全溫度。
3、操作室內(nèi)放入1000g鈀粒(封閉)和500g干燥劑,并放入美蘭指示劑(封閉)。
4、 關(guān)緊取樣室內(nèi)外門(mén),并抽真空校驗(yàn)。
5、操作室內(nèi)*次置換(氮?dú)庵脫Q):
(1)先用橡皮管插入操作室內(nèi)進(jìn)氣口,另一頭插入塑料袋。
(2)接通氮?dú)膺M(jìn)氣路,打開(kāi)氮?dú)饪刂崎y,使二只塑料袋充足氮?dú)猓缓笤o袋口。
(3)把乳膠手套套在觀察板法蘭圈上并扎緊。
(4)把塑料袋內(nèi)氮?dú)鉂u漸地放于操作室內(nèi),至全部放出。
6、操作室第二次置換(氮?dú)庵脫Q)重復(fù)一次充氮過(guò)程,并注意隨時(shí)用腳踏開(kāi)關(guān)開(kāi)閉排氣。
7、操作室第三次置換(混合氣體置換):
(混合氣體配比為:N2 85%;H2 10%;CO2 5%)
(1)調(diào)換氣路打開(kāi)混合氣道通閥門(mén)進(jìn)氣,充氣時(shí)要隨時(shí)腳踏開(kāi)關(guān)開(kāi)閉排氣。
(2)混合氣充滿塑料袋后,關(guān)掉混合氣直通閥(三通閥),使混合氣經(jīng)過(guò)流量計(jì)輸入操作并調(diào)整流量計(jì),流量為每分鐘10毫升左右。
(3)把塑料袋內(nèi)混合氣漸漸排于操作室內(nèi)。
(4)通過(guò)三次換氣后,操作室內(nèi)氣體含氧量已處于極微量狀態(tài)。
8、操作室內(nèi)打開(kāi)鈀粒除氧劑,接通除氧催化器電源進(jìn)行催化除氧,一小時(shí)后打開(kāi)美蘭指示劑(美蘭安瓶)觀察其變色情況,不變色為操作室內(nèi)達(dá)到厭氧環(huán)境。
9、開(kāi)紫外線滅菌燈,室內(nèi)進(jìn)行滅菌處理。滅菌時(shí)間自定。
二、菌種的置入和培養(yǎng)
1、檢查取樣室內(nèi)門(mén)并關(guān)緊之。
2、打開(kāi)取樣室外門(mén),將菌種放入取樣室后即關(guān)上外門(mén)。
3、 取樣室充氮置換三次過(guò)程:先抽真空度500毫米汞柱(66Kpa)以上停,然后人工打開(kāi)氮?dú)忾y門(mén)進(jìn)氣,使指針回復(fù)零位后進(jìn)行下次操作。
4、如選定真空度較低就需要增加置換的次數(shù)。
5、取樣室內(nèi)外門(mén)開(kāi)啟,關(guān)緊要抽低真空度100毫米汞柱(13 Kpa)檢驗(yàn)及幫助操作。
(1)每天在操作室內(nèi)打開(kāi)美蘭指示劑觀察,正常情況下使用。如不正常就必須重新?lián)Q氣。
(2)要長(zhǎng)期連續(xù)輸入微量的混合氣體,使補(bǔ)進(jìn)的氫氣能和微量的氧結(jié)合通過(guò)催化吸收,保證了室內(nèi)厭氧狀態(tài),補(bǔ)入混合氣流量選定為每分鐘10毫升左右。
(3)連續(xù)培養(yǎng)運(yùn)行一天,更換一次除氧劑和干燥劑。
7、接種棒滅菌器的應(yīng)用:
(1)隨時(shí)用鎳鉻電熱絲使電極短路而變赤熱以進(jìn)行殺菌(接種棒)。
(2)熔蠟處可直接放上,試管封蠟口旋轉(zhuǎn)熔蠟。
8、操作室里的培養(yǎng)箱內(nèi)的溫度可任意選擇和控制。
9、混合氣瓶、氮?dú)馄枯敵鰤毫φ{(diào)整:調(diào)節(jié)減壓閥,使輸出壓力為0.1Mpa左右。