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厭氧培養(yǎng)箱操作室厭氧環(huán)境的形成

更新時(shí)間:2016-06-14 點(diǎn)擊量:1289
 厭氧培養(yǎng)箱亦稱厭氧工作站或厭氧手套箱。厭氧培養(yǎng)箱是一種在無氧環(huán)境條件下進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)及操作的裝置。它能提供嚴(yán)格的厭氧狀態(tài)恒定的溫度培養(yǎng)條件和具有一個(gè)系統(tǒng)化、科學(xué)化的工作區(qū)域。
(一)操作室厭氧環(huán)境形成:
1. 按使用要求放置好必要的附件和器具,并向操作室內(nèi)放入二個(gè)無毒塑料袋;
2. 通電源開照明燈,開溫控儀,調(diào)節(jié)所需溫度及安全溫度;
3. 操作室內(nèi)放入1000g鈀粒(封閉)和500g干燥劑,并放入美蘭指示劑(封閉);
4. 關(guān)緊取樣室內(nèi)外門,并抽真空校驗(yàn);
5. 操作室內(nèi)*次置換(氮?dú)庵脫Q):
  A. 先用橡皮管插入操作室內(nèi)進(jìn)氣口,另一頭插入塑料袋;
  B. 接通氮?dú)膺M(jìn)氣路,打開氮?dú)饪刂崎y1,使二只塑料袋充足氮?dú)?,關(guān)閉閥門1,然后扎緊袋口;
  C. 把乳膠手套套在觀察板法蘭圈上并扎緊;
  D. 把塑料袋內(nèi)氮?dú)鉂u漸放于操作室內(nèi),至全部放出。
6. 操作室第二次置換(氮?dú)庵脫Q)重復(fù)一次充氮過程,取樣室先抽真空,并注意隨時(shí)用腳踏開關(guān)開閉排氣。
7. 操作室第三次置換(混合氣體置換):(混合氣體配比為N2 85%、H2 10%、CO2 5%)
  A. 調(diào)換氣路打開混合氣閥3進(jìn)氣,充氣時(shí)取樣室先抽真空,并隨時(shí)用腳踏開關(guān)開閉排氣;
  B. 混合氣充滿塑料袋后,關(guān)掉混合氣閥并打開閥5,使混合氣經(jīng)過流量計(jì),調(diào)整流量計(jì),流量為每分鐘10ml左右;
  C. 把塑料袋內(nèi)混合氣漸漸排于操作室內(nèi);
  D. 通過三次換氣后,操作室內(nèi)氣體含氧量已處于極微量狀態(tài)。
8. 操作室內(nèi)打開粑粒除氧劑,接通除氧催化器電源進(jìn)行催化除氧,一小時(shí)后開美蘭指示劑(美蘭安瓶)觀察其變色情況,不變色為操作室內(nèi)達(dá)到厭氧環(huán)境;
9. 開紫外線滅菌燈,室內(nèi)進(jìn)行滅菌處理,滅菌時(shí)間按具體實(shí)驗(yàn)自定。
 
(二)菌種的置入和培養(yǎng):
1. 檢查取樣室內(nèi)門并關(guān)緊之;
2. 打開取樣室外門,將菌種放入取樣室后即關(guān)上外門;
3. 取樣室充氮置換三次過程:打開真空泵,先抽真空度500ml汞柱(66kPa)以上停,然后人工打開氮?dú)忾y2進(jìn)氣,使指針回復(fù)零位,關(guān)掉閥2。第二次重復(fù)操作一次。第三次操作時(shí),使真空度500ml汞柱(66kPa)以上停,然后打開閥4進(jìn)混合氣,使指針回復(fù)零位,后掉閥4。取樣室充氮置換三次過程結(jié)束;
4. 如選定真空度較低就需要增加置換的次數(shù);
5. 取樣室內(nèi)外門開啟、關(guān)緊,再抽低真空度100ml汞柱(13kPa)檢驗(yàn);
6. 厭氧培養(yǎng)箱需要長(zhǎng)期連續(xù)使用的條件:
  A. 每天在操作室內(nèi)打開美蘭指示劑觀察,如不正常就必須重新?lián)Q氣;
  B. 要長(zhǎng)期連續(xù)輸入微量的混合氣體,使補(bǔ)進(jìn)的氮?dú)饽芎臀⒘康难踅Y(jié)合通過催化吸收,保證室內(nèi)厭氧狀態(tài),補(bǔ)入混合氣流量選定為每分鐘10ml左右;
  C. 連續(xù)培養(yǎng)運(yùn)行一天,更換一次除氧劑和干燥劑。
7. 操作室內(nèi)培養(yǎng)室內(nèi)室溫度可任意選擇和控制。
8. 混合氣瓶、氮?dú)馄枯敵鰤毫φ{(diào)整:調(diào)節(jié)減壓閥,使輸出壓力0.1Mpa左右。
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